Klonovanie génov a génovej amplifikácie (PCR)

encyklopédie ochorení [rodinného lekárstva]
génové klonovanie a amplifikácie génu (vrchol ČR)
génové klonovanie a amplifikácie génu (PCR ) Vysvetlím génové klonovanie a amplifikáciu génov (PCR).
autor: Hyogo College of Medicine komentárom (stĺpce)
klonovanie génu
Human Genome Project, ktorá bola vyhlásená v decembri 2004 u profesora genetiky vzdelávanie Yoshihiro Yamamota
gén klonovanie a amplifikácie génu (PCR) Celkový počet ľudských génov sa odhaduje na približne 22 000. Je ľahké extrahovať DNA z ľudských buniek, ale aby sme objasnili funkciu jedného z génov v ňom, nemôžeme nič robiť. Je potrebné oddeliť fragmenty DNA nesúce požadovaný gén a zosilniť ho. Ide o metódu nazývanú klonovanie génov, ktorá používa vektor, ktorý je DNA, ktorú možno množiť v bunke. DNA rozštepte na malé fragmenty s reštrikčnými enzýmami a spojte ich s vektorom a vráťte sa do hostiteľských buniek. Fragmenty DNA obsahujúce požadovaný gén v tomto štádiu sú oddelené od väčšiny iných nežiaducich DNA. Ďalej, rastúce hostiteľské bunky (rekombinantné) nesúce rekombinantnú DNA môžu tiež amplifikovať požadovanú DNA. V baktériách a podobne sú štruktúrne gény s informáciami o aminokyselinovej sekvencii DNA jedného spoja. Ešte sa vrátiť do vhodných hostiteľských buniek, pripojených k jeho objednávky vektora, pretože gén je proteín vytvoriť mRNA je produkovaný, či požadovaný gén mohol byť klonovaný nájdete pomerne jednoduché.
Avšak od génu, ako je človek, je intronom, ktorý nemá informácie o aminokyselinové sekvencie, väčšie, ako celok, bude tiež prekážkou je klonovanie génu exóny sú od seba oddelené. Preto sa používajú prostriedky ako je klonovanie fragmentu DNA obsahujúceho exón s vektorom a potom selekcia rekombinantu s DNA zodpovedajúcou mRNA.
Ďalej, pretože hotový mRNA neobsahuje IntronA, DNA k nemu zodpovedajúce z mRNA (komplementárna DNA: cDNA) mať metóda tiež použitá, že klonovanie sa syntetizuje za použitia enzýmu. Ak môže byť cDNA požadovaného génu oddelená, môže sa vyšetriť na stanovenie aminokyselinovej sekvencie proteínu produkovaného génom.
klonovanie génu z vyšších organizmov, ako sú ľudia, a metódy, ktoré priamo týmto spôsobom z DNA, boli nepriame metódy, že plechovka zhotovený z mRNA, kompletný obraz génov z oboch štúdiách sa zistilo, Je to. Keď
génová amplifikácie (PCR)
gén môže byť klonovaný, je relatívne ľahké určiť, nukleotidovej sekvencie je genetická informácia, ktoré držia DNA. Akonáhle poznáte nukleotidovú sekvenciu, môžete PCR amplifikovať a preskúmať iba špecifickú časť DNA.
Pre PCR je potrebných dva typy syntetickej DNA (primér) s dĺžkou 20 až 30 nukleotidov. Stanovte priméry s rovnakou sekvenciou ako nukleotidová sekvencia každej dvojvláknovej DNA známej sekvencie na oboch koncoch časti DNA, ktorá sa má amplifikovať. DNA polymeráza extrahovaná z tepelne odolných baktérií žijúcich v horúcich prameňoch atď. Môže dlhodobo stabilne replikovať DNA aj pri teplote blízkej 100 ° C. DNA obsahujúca
boli odstránené z bunkovej šablóny (Igate), ktoré dva priméry a tepelne stálej DNA polymerázy Niektoré skúmavky, a nastavenia prístroja je možné ovládať teplotu a čas. Napríklad pridanie 30 sekúnd teplota 94 ° C, DNA sa vloží ako templátu sa delia na jednovláknovou rozštiepeného vodíkové väzby. Po ochladení na teplotu 55 ° C bude primer primeraná vodíkovou väzbou so zodpovedajúcou templátovou DNA a čiastočne bude mať dvojvláknovú štruktúru. Zvýšením teploty na 72 ° C, vhodné pre reakcie termostabilné DNA polymerázy začať syntézu DNA z viazaného miesta primeru. Tento 94 ℃ 55 ℃, ktorý sa vykoná 30 cyklov 72 ° C, a potom amplifikovanej niekoľkokrát miliónkrát iba DNA časť záujmu. Bez toho komplikovaný spôsob
klonovanie génu, to je PCR, ktoré môžu byť oddelené amplifikáciu iba požadované DNA z malého množstva templátové DNA. Napríklad extrakciu DNA ako templátu časť rakovinové tkanivá, ako je napríklad, že pre amplifikáciu génu, ktorý je príčinou PCR Degan stanovená jeho nukleotidovej sekvencie, nájsť mutácie vyskytujúce Niektoré z génu Budete to môcť urobiť.
rovnako ako genetická diagnostika, ktoré posúdi mutáciu génu, ktorá spôsobuje rôzne choroby, ako aj gény zodpovedné za genetické choroby, aby spôsob podľa tohto PCR je.