Cell- Based ELISA protokol

ELISA , alebo ELISA test sa používa ako diagnostický nástroj v medicíne a v biologickom výskume na kvantifikáciu množstva konkrétneho proteínu . ELISA používa protilátky pre detekciu proteínu záujmu a činidlá , ktoré vytvára požadovanú farbu . Množstvo farby sa vzťahuje na množstvo proteínu . Bunková kultúra

Bunky by mali byť umiestnené do jamiek 96 - jamkové doštičke s mikro - 100 litrov rastového média a bunky ponechané cez noc usadiť. Ak ste študoval reakciu buniek sa k faktoru by bunky byť sérum vyhladované po dobu 24 hodín a potom stimulované faktorom v rámci štúdie.
Fixácia a primárnej protilátka

Po odstránení média , sú bunky ošetrené s médiom , ako je formaldehyd , 3 percentá alebo metanolu . Bunková membrána musí byť Permeabilizované , aby protilátka preniknúť do bunky . Permeabilizace môže byť dosiahnuté použitím 0,1 percenta Triton , ak metanol predtým nebol použitý . Nešpecifická väzba môže byť zabránené pomocou 10 percent fetálneho teľacieho séra zriediť v roztoku fosfátom tlmeného . Po odstránení bloku , môže byť použitá primárna protilátka a inkubovaná po dobu jednej hodiny .
Sekundárne protilátky a Stain

Vyberte primárnu protilátku a umývanie trikrát . Pridať sekundárnej protilátky spojené s detekčným činidlom , ako je chrenová peroxidáza . Inkubujte po dobu jednej hodiny . Washington Pridať chemiluminiscenčná substrát . Vyvinúť a skenovať doska pre farebné intenzity .