Priľnavé Bunky Protocol

Bunky v kultúre sú buď formou kultivované v suspenzii, ako je napríklad krvné bunky alebo buniek, ako sú fibroblasty, ktoré vyžadujú, aby povrch, ktorý sa môže dodržiavať. Niektoré z povrchov môže vyžadovať lakovanie v rôznych extracelulárnych matríc v závislosti od typu bunky a štúdium. Všetky bunkové kultúry vyžadujú sú vykonávané v aseptických podmienkach. Optimálne prostredie

Väčšina bunky môžu byť kultivované v médiu Dulbecco modifikovanom Eagle, (DMEM) alebo Roswell Park Memorial Institute (RPMI) s prídavkom 10 percent fetálneho teľacieho séra, 2 z milimoles aminokyseliny glutamín a antibiotiká, napríklad, 100 jednotiek penicilínu a 0,1 mg na ml streptomycínu. Bunky sú uchovávané v ich médiách vo vlhkej inkubátora pri 37 ° C a 5 percent oxidu uhličitého.
Rozdelenie
Bunky

by mali byť kontrolované denne infekcie, smrť alebo rast . Akonáhle sa tkanivové kultúry banka je 80 percent pokryté v bunkách, by mali byť bunky rozdelené na udržanie zdravia buniek sa a logaritmickej fáze rastu. Media sa odstráni a bunky sa premyjú fosfátom tlmeného. Ľudmi bez bunky vyžadujú pridanie trypsínu a etyléndiamíntetraoctovej kyseliny (EDTA), na odstránenie proteínov bunkovej adhézie. Jemné miešanie by mala odstrániť bunky. Média musí byť pridaný k neutralizácii trypsín /EDTA riešenie.
Subkultúry

nariedené bunky a tryspin /EDTA možno odstredí, aby sa pelety a pranie bunky. Bunky môžu byť znovu suspenduje v médiách a zriedi a replated do nových fliaš. Zakaždým, keď sa bunky rozdelia bunky priechod číslo sa zvýši o jednu.
Media Zmeniť

Médiá by mala byť zmenená dvakrát týždenne po odstránení starých médií a nahrádza sa nový, zahreje médií.