PCR Základy

polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) je metóda replikácie DNA. Táto metóda sa nazýva po DNA polymerázy, enzým, ktorý katalyzuje proces replikácie DNA. Kary Mullis rozvinul techniku ​​v roku 1984 a získal Nobelovu cenu za chémiu za svoju prácu v roku 1993. Aplikácia PCR

aplikácií
Spoločné PCR zahŕňajú DNA odtlačkov prstov (v ktorom sú fragmenty DNA izolované a porovnaná s existujúcimi dátami), analýza veľmi malé množstvo vzorky (ktorá umožňuje vedcom rekonštruovať vyhynutých organizmov a zomrelých historické postavy) a diagnostika ochorení (vrátane vírusovej DNA a výskum rakoviny)
PCR komponenty

Nevyhnutné komponenty a činidlá PCR reakcie sú:. genomická DNA (šablóna replikovať), dva primery (jeden dopredu a jeden dozadu) doplnkom sekvencie templátu DNA, reakcie koktail (vrátane Taq polymerázy a pufer, ktorý poskytuje životaschopný prostredie, v ktorom reakcia nastáva) a substrát pre enzým Taq . (nukleotidy, ktoré vám pomôžu "postaviť" jednotlivé prvky)
Kroky PCR

Kroky reakcie sú: Denaturácia (počas ktorej je teplota zvýšil oddeliť vlákna DNA šablóny) Žíhanie náteru (pri ktorej je teplota ochladí na podporu voľne plávajúci primer sekvencie dodržiavať izolované smery DNA šablón) a rozšírenie (počas ktorej Taq polymerázy priľne k náteru a použitie zdarma plávajúce nukleotidov pre replikáciu každej izolovanej DNA prvku šablóny). Opakovaním tohto procesu niekoľkokrát sa izolovať každej replikované sekvencie z pôvodnej vzorky DNA. Každé opakovanie exponenciálne zvyšuje množstvo replikované DNA, kým nie je dostatočné množstvo pre požadovaný experimentu. Pre optimálnej teplote a ďalších podmienkach, pozri Yale univerzita je "Navrhovanie PCR programy" na zdroje nižšie.
Priebeh PCR

reakcia môže tiež byť popisovaný v troch etapách : Zosilnenie (pri ktorej je DNA replikácie exponenciálne), Level-Off (pri ktorej je polymeráza Taq stráca aktivitu), a plošina (v tejto dobe nemôže viac vyrábať v súčasnej reakcie). Pre interaktívne ukážka PCR reakcie, pozri University of Utah "PCR Virtual Lab" v zdrojoch nižšie.