PBMC Protokol

mrazeného mononukleárny bunky periférnej krvi (PBMC) sú častým zdrojom vzoriek pre výskum, ktorý zahŕňa imunoterapia a odpovede na vakcíny. Zatiaľ čo niektoré protokoly sú obmedzené na izoláciu a zmrazenie fázy procesu, iní zahŕňajú rozmrazovanie postupy. Postup izolácie a zmrazenie

komerčné zmes pre podporu separácie je umiestnený do každého 50 ml centrifugačnej skúmavky a rúrky sú centrifugovány po dobu tridsiatich sekúnd. Čiapky krvných skúmaviek sa postriekajú s alkoholom pred otvorením, potom antikoagulačnej spracované krv potom sa preniesol cez pipetou do odstredivky trubiek. Plasma vrstva krvi sa odsaje pipetou.
Tuhnutie

bunky z predchádzajúceho kroku sa potom odstredí sa pufrovaného fyziologického roztoku trikrát. Potom, čo sa počtu buniek, budú vzorky centrifugovány potom sa rozptýli v mrazivom prostredí. Exempláre v mrazivom prostredí sú rozdelené medzi ďalšie cryovials v jednom ml čiastky. Fľaštičky sú uložené cez noc v -70 °

mrazničkou C a presťahoval sa na dlhodobé skladovanie v kvapalnom dusíku na ďalší deň.
Safe Rozmrazovanie

Cryovials sú prenesené z tekutého dusíka na 37 ° C vodnom kúpeli a vzorka sa nechá rozmraziť jedno-dvaminuta. A teplé transportné média sa pridá do každej fľaštičky. Zriedený bunková suspenzia sa odstreďuje počas siedmich minút. Počet a životaschopnosti buniek sa kontroluje, Ak bunky potrebujú sústrediť, sú vzorky centrifugovány ďalších sedem minút. Vzorka sa riedi do pracovného roztoku a odpočíval dvanásť-osmnácthodin pred začatím vyšetrenia v uvedenom protokole
Referencie

Biomed Central:. Protokol pre izoláciu , Kryokonzervácia a Rozmrazovanie PBMCs siete

pre darcu pankreasu varhany s diabetom: Izolácia mononukleárnych buniek periférnej krvi (PBMC)
zdroje

Los Almos National Labs: Stanovenie protilátok v riešení PBMC

vedcov: Izolačné lymfocytov z plnej krvi.