Biotinylace Protocols

Biotinylace je proces prepojenia biotín, alebo vitamín H, na proteín, alebo iné molekuly. Tento vedecký postup je väčšinou používaný v biotechnológii a molekulárnej biológie výskum zahrňujúci DNA, bielkoviny a antigény, ktoré sú molekuly imunitný systém rozpoznať ako votrelci. Biotinylace protokoly zahŕňajú Biotinylace protilátok a peptidov, rovnako ako bunkový povrchový biotinylace. Biotinylace protilátok

Ak chcete prepojiť biotín na protilátky produkovať proteíny, keď antigén vstupuje do tela, aké používajú technici hydrogénuhličitanu sodného (NaHC03) pri pH 9, dimetylsulfoxid (DMSO);

NHS Biotín-a roztok látky zvanej PBS. Vzorky sa zmieša s roztokom hydrogénuhličitanu sodného, ​​ktorý sa neskôr pridal k NHS-biotínu v DMSO. Roztok sa potom pridá do analyzovaných protilátky a inkubujú sa na časť zariadenia s názvom rotátor po dobu štyroch hodín pri izbovej teplote alebo cez noc pri 39,2 stupňov Celzia. Nakoniec sa roztok sa riedi PBS.
Povrchu buniek
Biotinylace

na Biotinylace povrchu bunky protokolu, aké používajú technici tkanivové kultúry, fosfátom tlmeného (PBS) pri pH 7.4 a sulfosukcinimidyl-2-(biotinamido) etyl-1 ,3-dithiopropionate pufer na vyrovnanie kyselín obsahujúce aminoskupiny a TrisCl, podľa Current Protocols in Proteín Science.The buniek sa zmieša s biotínom a pufer, dekantuje a centrifugovány . Obsah pevnej látky a špecifické bielkoviny sú neskôr analyzované na tanieri gélovej elektroforézy.
Biotinylace peptidy

vykonávať Biotinylace peptidov, použité činidlo je NHS biotín-SS, podľa Philipa Pastiera v "monoklonálnych protilátok: praktický prístup." Peptidy sú krátke fragmenty aminokyselín, molekúl, ktoré vytvárajú bielkoviny a DNA. V tomto protokole je komerčný riešenie NHS-SS Biotín rozpustí vo vode. Potom peptid vzorky sa pridá k tomu, spoločne s roztokom hydrogénuhličitanu sodného, ​​aby vyrovnanie kyslosti alebo pH. Roztok sa potom inkubuje na ľade po dobu dvoch hodín. Technici môžu pozorovať vzorky s alebo bez biotínu molekúl.