Tkanivová kultúra tipy

pre tkanivové kultúry je propagácia buniek v kvapalnom rastovom médiu v laboratóriu pre rôzne vedecké účely. Napríklad, sú tkanivové kultúry používajú v diagnostike genetických ochorení, ako médium pre pestovanie intracelulárnym patogénom, ako sú baktérie a vírusy, alebo pri vyšetrovaní bunkách samotných. Bunky tkanivové kultúry

Niektoré bunky dodržiavať dna Petriho misiek, alebo aj naďalej pozastavená v kvapaline. Bunky môžu byť rastlinného alebo živočíšneho pôvodu. Bunky používané v tkanivových kultúrach môže byť primárna bunky, čo znamená, že boli zozbierané priamo z organizmu, alebo z bunkovej línie, ktorá je udržiavaná v kultúre. Bunkové línie sú často rakovinové bunky, a to je treba brať do úvahy pri plánovaní alebo interpretácii experimentov.
Doprajte Bunky Jemne

ľudmi bez bunky sú odstránené z ich Petriho misky pre priechod do škrabanie alebo proteázy, všeobecne trypsín a EDTA. Škrabanie zabíja mnoho buniek, a je potrebné použiť iba pri príprave fragmenty buniek (kvapalné prípravky s obsahom bunky pre analýzu) alebo v prípade, trypsín /EDTA musí byť bezpodmienečne zabrániť.

Trypsinizing odstráni nielen proteíny, ktoré sa riadia bunky do misky ale väčšina ďalších proteínov na membrány buniek, príliš. Bunky loptu a trvať nejakú dobu, zvyčajne cez noc, obnoviť puto s misky. Pridanie minimálne množstvo trypsínu - asi 1 ml na 25 cm2 banky - hojdacia banky po dobu piatich sekúnd alebo menej, aby náter sa nárast a potom prúdi z alebo odsávanie prebytočnej trypsínu sa zníži množstvo trypsínu, ktoré sa nárast je vystavená. Nechajte bunky odpočinok v inkubátore pri trypsinizací.

Po bunky skĺznuť na dno misky, pridajte média so sérom a odsajte lyzátu hore a dole pipetou opatrne. Nechajte trochu médiá zostať v miske, ako si pipeta hore a dole niekoľkokrát k rozpadu zhlukov a získať aj suspenzie.

Nevysávajte bubliny do pipety. Tiež nie je energicky mix alebo vieru bunková suspenzia;. Bunky sú veľmi krehké v tejto zovretej-up stave
k ohrevu Neaktívne alebo nie k ohrevu Neaktívne

techniky bunkovej kultúry boli v plienkach, sa fetálne hovädzie sérum (FBS) známe, že obsahujú komplementu, ktoré sú proteíny imunitného systému, ktoré lýzu buniek. Komplementu nie sú žiaduce v bunkovej kultúre. Tepelná inaktivácia FBS na 56 stupňov Celzia po dobu 30 minút, spôsobí komplementu neaktívne. Predhriatie FBS na 37 stupňov Celzia je tiež dosť inaktiváciu komplementu.

V prvých dňoch, tepelne inaktivovať FBS tiež zabil Mycoplasma a iné nečistoty. V tej dobe bol filter sterilizácia vykonaná s 0.45um filtrami. Dnes sa filter sterilizovať FBS a médií cez 0.1um alebo dokonca 0.04um filtrov. Nie mycoplasma bude prekĺznuť tomto

To nás stavia otázku, či pre ohrev deaktivovať

Tepelná inaktivácia degraduje všetky komponenty - FBS .. Ako sú vitamíny, aminokyseliny a rastové faktory -. prípadne pod prahom pre niektoré vyberavé bunkových línií

Ak pracujete s pomaly rastúcou alebo maškrtný bunkové línie, považujú len filtrovať sterilizáciu vaše FBS. Možno zistíte, zvyšuje sa odolnosť vašich buniek.