Ako môžem Line Up DNA pre analýzu?

Agarózovom géle Elektroforéza je najčastejší spôsob vizuálnej analýzou DNA fragmentov, čo umožňuje technikom vizuálne rozpoznať fragmenty DNA na základe veľkosti. Agarózovom géle udržuje magnetické pole, a, pretože DNA má záporný náboj, sa pohybuje smerom k pozitívnemu koncu magnetického poľa. Menšie fragmenty DNA rýchlejšie pomocou gélu a väčšie úlomky pohybovať pomalšie. DNA fragmenty sú fluorescenčne zafarbené pomocou interkalační látky známe ako Etídiumbromid. To umožňuje pre porovnanie niekoľkých elektroforéza vzoriek DNA na géle. Veci, ktoré budete potrebovať
agarózovom géle, 0,7 percenta na 2 percentá
Tris-EDTA boritanu (TBA), tris-acetát-EDTA (TAE), sodná soľ lítium acetát (LA), kyselina boritá (SB) pufra
Ethídiumbromid
Gel Loading Dye
Gél zásobník
elektroforéza komora
Rukavice
ochranných okuliarov
pipety
elektroforéza hrebeň
Zobraziť ďalšie inštrukcie
Príprava 0,7 percenta agarózovom géle
1

Odváži sa 0,7 g agarózy prášku a potom umiestnite do veľkého (250 ml) Erlenmeyerovej banky.
2

Pridať 100 ml z 1X (pravidelné sily) pufra (TAE, TBE, SB alebo LB pufer) do Erlenmeyerovej banky obsahujúcej prášok agarózový.
3

Mikrovlnná rúra alebo tepla pomocou Bunsen horák po dobu približne jedného minút, kým sa roztok stane čírym a agarózy nerozpustí.
4

Banku zo zdroja tepla a nechajte ju vychladnúť na 55 až 60 stupňov Celzia.
5

Pridajte 1 ul (mikrolitrov) s Etídiumbromid do chladeného roztoku agarového gélu pomocou zodpovedajúcej veľkosti pipety, zvyčajne 1 ml. Swirl riešením miešať.
6

Nalejte gél pomaly do gélu zásobníka sa zabezpečí, aby žiadne bubliny formácie počas tohto procesu. Pokiaľ nie sú dodávané aj priehrady s gélovou zásobníka, použite krycou páskou sa vytvoriť z nich.
7

Podať elektroforézy hrebeň opatrne do gélu, zabezpečuje pevnú pozíciu a v správnej orientácii. Elektroforéza hrebene sa môžu značne líšiť v počte zubov, ktoré majú. Nechajte gél sada pre približne 25 minút jazdy
8

ponorte gél v rovnakom pufri použitého k príprave agaorse riešenie -., V tomto prípade 1X vyrovnávacej pamäte. Ponorte gél až v 5 ml pufrom.
Príprava a nakládka DNA do agarózovom géle pre analýzu
9

Prenos 5 až 10 ul váš vzorka (y) z ich reakčných skúmaviek na čerstvé rúrok. V prípade, že chcete využívať celý reakčnej zmesi, čerstvé rúrka nie je nutné.
10

Pridať 0,2 x pufra do každej z vašich čerstvých skúmaviek s roztokom vzorky DNA pre nakládku.

11

Vytiahnite elektroforézy hrebeň pomaly, čo zaisťuje, že nemusíte rozbiť gél alebo vytvoriť nejaký priestor medzi spodnou gélu a gél zásobník.
12

Pridať piatich do 12 ul príslušného markerom DNA do prvej jamky vytvorenej elektroforézy hrebeň. Či alebo nie markér DNA je vhodné, závisí na veľkosti fragmentov čakáte od vzorky.
13

zaťaženie päť až 10 ul svojich vzoriek do zostávajúcich jamiek a pridajte rovnaké množstvo rovnakého markerom DNA do finále dobre.
14

Umiestnite elektródy do elektroforetické komory pripojením vodiče do príslušných zdierok do komory a nastavte elektródu 50-150 V.

15

Nechajte gél spustiť jednu až štyri hodiny.
Analýza výsledkov
16

Vyberte gél z gélu komory a umiestniť buď v UV priestore pre vizuálnu identifikáciu, alebo dajte do stroja, ktorý je schopný odfotografovať gélu.
fotografie 17

Zmerajte vzdialenosť znaky migrácie vo svojich studní.

18

Sprisahanie proti vzdialenosti, veľkosti kapiel na papieri grafe semilog a nakreslite priamku najlepšie.
19

výpočet vzdialeností vašich neznámych kapiel.

20

Odhad veľkosti vašich neznámych kapiel čiara, až zo vzdialenosti prejdenej vaše neznámych kapiel, ktoré spĺňa líniu najlepšie hodia.
21

kresliť ďalšie čiaru od tohto stretávania sa k veľkosti osi.