Metódy merania NADPH-oxidáza

enzým NADPH oxidáza je identifikovaný ako výrobca reaktívnych foriem kyslíka počas procesov vrátane rastu cievnych hladkých svalových buniek. Tieto reaktívne formy sú spojené s radom ochorení, vrátane hypertenzie, diabetes, rakovina a zápal, metódy pre sledovanie aktivity tohto enzýmu je rozhodujúce pre možnú liečbu rozvoj. NADPH oxidázy

NADPH oxidázy patrí do skupiny enzýmov, ktoré pomáhajú pri prenose elektrónov medzi NADPH a kyslíka. Avšak, NADPH oxidázy má jedinečnú schopnosť produkovať reaktívne formy kyslíka z tejto reakcie, v porovnaní s ostatnými členmi rodiny, kde je reaktívne formy kyslíka vytvorené inými prostriedkami. Multimerní proteínový komplex, NADPH oxidáza sa skladá z membrány viazané flavocytochrome b558, ktorý sa používa ako meranie značkou.
Reaktívnych foriem kyslíka (ROS) Generácia

hlavným zdrojom ROS, najmä peroxidu vodíka, NADPH oxidáza vytvoria malé, ale konzistentné množstvo cez jeho izoformy vyjadrené v cievach, ktoré sú zapojené v signalizačných procesov. Táto dôsledná výroba môže nakoniec premôcť prirodzené antioxidačný systém, čo spôsobuje stratu ochranných látok, ako je oxid dusnatý, a vytvorenie ešte výkonnejšieho ROS.
Chemiluminiscenčná metóda

chemiluminiscencie umožňuje vysoko citlivé, automatizované meranie aktivity NADPH oxidázy cez rozsahu koncentrácií. Pri tejto metóde sa NADPH substrát do vzorky tkaniva obsahujúce NADPH oxidázy. Po reakcii, je generovaný ROS a reaguje so zloženým lucigenin produkovať chemilluminescent efekt, ktorý sa meria. Luminiscencia je priamo úmerná NADPH oxidázy aktivitu, pretože enzým určuje rýchlosť reakcie.
Kinetic Assay cez
prietokovej cytometrie

tejto metódy sú analyzované vzorky tkaniva pomocou prietokovej cytometrie. Kostná dreň je oddelený od vzorky s použitím Hanks 'Balanced Salt Solution. Špecifické škvrny a detekčné protilátky sa pridá ku vzorke, v polystyrénových skúmaviek. Vzorka sa potom inkubuje, premyje Hanksovej vyváženého soľného roztoku s označením molekulárnych sond a pripravený z prietokovej cytometrie. Elektrónky sú tiež pre porovnanie a pre kalibráciu prietokového cytometra. Stroj je potom bežal a meranie zaznamenané.