TPA Čistenie Protocols

tkanivový aktivátor plazminogénu, alebo TPA je typ serínové proteázy, čo je proteín schopný zničiť krvných zrazenín. TPA sa nachádza v bunkách, ktoré pokrývajú vnútorné cievy. TPA protokoly sú súčasťou farmaceutického a lekárskom výskume pre zdvih, rovnako ako ochorenie srdca a pľúc, ako je pľúcna embólia a infarktu myokardu. TPA čistenia sa vzťahuje na odpojenie tohto proteínu z iných molekúl prostredníctvom série postupov, vrátane chromatografia a elektroforéza. Čistenie TPA z obličiek Hog

Tento protokol používa v štúdiách fibrinolýzy, proces rozdeľovania produktu koagulácia fibrín, ktorý sa v súvislosti s vytváraním nádorov. Technici extrakt acetónu z TPA sušených bravčových obličkách draselným octanového pufra, pH 4,2. Potom sa pridá síran amónny do buniek vyvolať precipitáciu. Dodávajú n-butyl-Sepharose na vzorky, ktoré sú potom analyzované na chromatographer. Concanavalin je tiež pridaný a chromatograph.y k oddeleniu rôznych proteínov sa vykonáva.
Čistenie TPA vaječníkov čínskeho škrečka a bunky E. coli

Proteín je čistota Dôležitým faktorom úspechu biologické experimenty. Čistený TPA je komerčne k dispozícii, a tým šetrí čas a vyhnúť sa riziku ohrozenia experimentu v dôsledku zle vyčisteného roztoku. Tento protokol zahŕňa čistenie procesy TPA v cicavčích a bakteriálnych buniek. Technici urýchliť vzoriek buniek, filtrát je a vykonávať afinitu a gélovej chromatografie analýzu. Neskôr sa analyzovať a porovnať výsledky pred priemyselnú výrobu.
Výraz aktívneho človeka TPA v E. coli

objasnené fragmenty buniek sú pridané do lyzín - Sepharose, analyzované v chromatographer a premyje roztokom chlóru. Ďalšia vzorka je vložený do druhej chromatografickej kolóny obsahuje proteíny, ktoré sa viaže k TPA s vysokou afinitou. Vzorka z druhého stĺpca sa zmieša s roztokom zinku-Sepharose. Výsledný proteín zobrazí viac ako 90 percent čistoty, podľa časopisu "Applied and Environmental mikrobiológie."